Das innuPREP PME cfDNA Kit – PP Mini, vorbefüllt wurde für die Isolierung zirkulierender zellfreier DNA (cfDNA) aus 2,5–3,5 ml Plasma, Liquor und Zellkulturüberstand entwickelt. Das Kit basiert auf einer neuen Technologie, der sogenannten PME – Polymer Mediated Enrichment (polymervermittelten Anreicherung). Im Gegensatz zu herkömmlichen Methoden und anderen kommerziell erhältlichen Kits beginnt das Verfahren nicht mit einer Probenlyse.
Die meisten kommerziell erhältlichen Kits verwenden Standardverfahren zur Nukleinsäureextraktion. Dabei wird die Probe zunächst lysiert, anschließend werden die Nukleinsäuren an ein Feststoffmaterial gebunden, gewaschen und schließlich eluiert. Aufgrund der sehr geringen Konzentration zirkulierender zellfreier DNA in Plasma und Liquor erfordern diese Methoden vergleichsweise große Probenvolumina, um ausreichend DNA für nachgelagerte Anwendungen zu gewinnen.
Dies führt dazu, dass die herkömmlichen Verfahren zeit- und arbeitsintensiv sind und einen hohen Reagenzienverbrauch aufweisen.
Im Gegensatz dazu beginnt die PME-Methode mit der Bindung der zirkulierenden zellfreien DNA an ein spezielles Polymer, wodurch das Probenvolumen erheblich reduziert wird. Anschließend wird die im Polymer gebundene cfDNA in einem speziellen Lysepuffer gelöst und extrahiert.
Das Kit kombiniert eine einzigartige patentierte Technologie zur Anreicherung von Biomolekülen mit einer hocheffizienten DNA-Extraktion unter Verwendung magnetischer Partikel. Die Extraktion erfolgt mit dem Magnetpartikelprozessor PurePrep Mini und ermöglicht die parallele und flexible Verarbeitung von 1 bis 16 Proben.
Die Reagenzplatte bzw. der Reagenzstreifen des Kits ist bereits mit nahezu allen für den Extraktionsprozess benötigten Reagenzien vorbefüllt.
Das Kit ist für die Anwendung durch professionelle Anwender vorgesehen. Die mit diesem Kit extrahierte cfDNA kann für eine Vielzahl nachgelagerter Anwendungen eingesetzt werden, darunter Amplifikationsreaktionen und weitere analytische Verfahren.
Diagnostische Ergebnisse, die mithilfe des Extraktionsverfahrens in Verbindung mit diagnostischen Tests erzielt werden, sollten unter Berücksichtigung weiterer klinischer bzw. labordiagnostischer Ergebnisse interpretiert werden. Um Unregelmäßigkeiten bei diagnostischen Ergebnissen zu reduzieren, sollten interne Kontrollen für nachgelagerte Anwendungen eingesetzt werden.
Ausgangsmaterial
2,5–3,5 ml Plasma, Liquor oder Zellkulturüberstand
Durchschnittliche Ausbeute
Abhängig von Qualität und Menge der Probe
Extraktionszeit
Ca. 70 Minuten einschließlich aller Arbeitsschritte